Fils de Gérard_Depardieu et Elisabeth_Depardieu , Guillaume Depardieu passe évidemment une grande partie de son enfance dans le monde du cinéma, apparaissant à l'occasion sur l'écran quand son père accepte de le trimballer avec lui sur les plateaux. Il est ainsi figurant à 4 ans dans "Pas si méchant que ça", puis adolescent dans "Jean de Florette" et "Cyrano de Bergerac", dans lequel il interprète un jeune soldat. C'est Cyril Collard qui lui donne sa vraie chance de comédien pour la première fois dans le téléfilm "Taggers", où il joue une petite frappe de banlieue, mais c'est sous l'égide d'Alain Corneau que Guillaume frappe très fort dès son premier film, "Tous les matins du monde", où il incarne le joueur de viole de gambe Marin Marais jeune
Un grave accident de moto le contraint la même année à se faire opérer du genou, opération pendant laquelle il contracte une maladie nosocomiale qui le poussera à se faire amputer de la jambe en 2003. Ces déboires ne l'empêchent pas cependant de continuer à tourner jusqu'à ce qu'une pneumonie foudroyante ne l'emporte sur le tournage de "L'enfance d'Icare" en 2008.