Stefano Accorsi étudie au Scientific Lyceum, puis est sélectionné en 1990 par Pupi Avati pour le rôle de Matteo dans le film Fratelli e sorelle aux côtés de Franco Nero. Le film terminé, il intègre l'Ecole de theâtre de Bologne, dirigée par Alessandra Galante Garrone, dont il sort diplômé en 1993. Il entre alors au Théâtre Bologna Arena, où il se produit dans différentes pièces du répertoire classique allant de Pirandello à Goldoni. En 1994, Stefano Accorsi devient populaire auprès du grand public italien grâce au spot publicitaire de la glace Maxibon réalisé par Daniele Luchetti. Un an plus tard, il incarne Alex, star de l'adaptation cinématographique du roman d'Enrico Brizzi, Jack Frusciante è uscito dal gruppo, réalisé par Enza Negroni.